蛋白酶抑制劑技術(shù)原理和分類

     蛋白酶抑制劑技術(shù)原理和分類
    當(dāng)細(xì)胞破碎的時候，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時應(yīng)當(dāng)使用蛋白酶抑制劑。因此對于我們想要研究的蛋白來說，選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對于蛋白純化路線設(shè)計(jì)來說顯得尤為重要。
    在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，影響終的結(jié)果。為了避免這些情況的出現(xiàn)，可以在樣品制備時盡可能低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris-base，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時，我們可以通過加入各種蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的降解。
    根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為以下4類：
    1、絲氨酸蛋白酶
    在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸，如糜蛋白酶、彈性蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、凝血酶、枯草桿菌蛋白酶、胰酶等。
    2、半胱氨酸蛋白酶（又稱硫醇或SH蛋白酶）
    在其催化中心含有半胱氨酸，如鈣蛋白酶、組織蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等。
    3、天（門）冬氨酸蛋白酶（羧基蛋白酶）
    在其活性中心含有天（門）冬氨酸，如組織蛋白酶D、木瓜蛋白酶、腎素等。
    4、金屬蛋白酶
    在其催化中心含有金屬離子，如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B、嗜熱菌蛋白酶等。
    除了蛋白酶抑制劑以外，在許多研究過程中，尤其是一些制藥公司和研究院所在研究藥理學(xué)機(jī)理的時候，需要了解蛋白磷酸化途徑，因此一個重要的步驟就是準(zhǔn)確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài)，所以蛋白抽提的另一個重要保護(hù)過程就是對磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù)。